Kits de tejido de ARN total

IBI Tri-Isolate (& Bacteria Lysis) Kit - Protocol

• Tamaño de la muestra: hasta 5 x 106 células cultivadas, 10 – 50 mg de tejido, hasta 200 µl de fluidos corporales (sangre, capa leucocitaria, suero, plasma), 1 x 109 células bacterianas, 20 – 50 mg de tejido vegetal
• Formato: Fenol, cloroformo isotiocianato de guanidina más sistema de columna giratoria
• Sin separación de fases de cloroformo

• Sin precipitación de ARN con isopropanol 

• Sin arrastre de fenol
• IBI Tri-Isolate es un isotiocianato de fenol y guanidina más un sistema de columna giratoria para la purificación conveniente de ARN total de alta calidad a partir de una variedad de muestras que incluyen células cultivadas, tejidos, fluidos corporales, bacterias y tejidos vegetales.
• Tiempo de operación: 15 minutos o menos
• Capacidad de unión: 50 µg de ARN de > 25 µl de agua libre de DNasa/RNasa
• Volumen de elución: 25 – 50 µl
• ARN de alta calidad: A260/A280 > 1,8, A260/A230 > 1.8
• Almacenamiento: Temperatura ambiente; Excepción: la ADNasa I y la lisozima deben almacenarse a -20 °C a su llegada
• Aplicaciones: construcción de bibliotecas de cDNA, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasa, transferencia Northern

INFORMACIÓN TÉCNICA

Inicialmente, las muestras se homogeneizan en IBI Isolate Reagent sin separación de fases con cloroformo ni precipitación de ARN con isopropanol. Después de la homogeneización de la muestra, simplemente una, lave y eluya el ARN total de alta calidad en agua libre de ARNasa. El ARN purificado se puede usar en una variedad de aplicaciones posteriores, incluida la construcción de bibliotecas de ADNc, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasas, transferencia Northern.

Control de calidad

IBI Tri-Isolate se prueba lote a lote. Se analizan 10 µl de un eluato de 50 µl de ARN purificado mediante electroforesis en un gel de agarosa al 0,8%.

¿Se pueden usar muestras de sangre congelada con el kit Tri-Isolate? Sí. Coloque la muestra congelada en un tubo de microcentrífuga de 1.5 ml y agregue 3 volúmenes de reactivo Tri-Isolate y deje que la muestra se descongele. Incube 5 minutos adicionales a temperatura ambiente y continúe con el resto del protocolo.

¿Se puede modificar el protocolo para adaptarse a muestras ricas en lípidos, como el tejido cerebral? Sí. Después de la homogeneización, centrifugue la muestra a 12 000 – 16 000 x g durante 2 minutos para eliminar las partículas insolubles. Después de la centrifugación de la muestra rica en grasas, una capa de grasa flotará sobre el sobrenadante. Retire y deseche la capa de grasa y transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga de 1,5 ml. Continúe con el paso #2 de unión de ARN.

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Total RNA Mini Tissue Kit - Protocol | Total RNA Mini Tissue Kit _ SDS

DESCRIPCIÓN: 

Tamaño de la muestra: hasta 25 mg de tejido/hasta 25 mg de tejido incluido en parafina

Tiempo de funcionamiento: 15 min o menos

Rendimiento esperado: 5 – 30 µg de ARN

Volumen de elución: 25-100 µl

El mini kit de ARN total para tejidos se diseñó específicamente para purificar el ARN total de una variedad de tejidos animales e incluidos en parafina. Las muestras de tejido se pueden homogeneizar de forma eficaz en un tubo de microcentrífuga utilizando el micropistolo proporcionado. Se utilizan detergentes y sales caotrópicas para lisar las células e inactivar la RNasa (se pueden seguir tratamientos opcionales con DNasa en columna). El ARN en la sal caotrópica se une a la matriz de fibra de vidrio de la columna giratoria. Una vez que se han eliminado todos los contaminantes, utilizando el tampón de lavado (que contiene etanol), el ARN total purificado se eluye con agua libre de ARNasa. El procedimiento no requiere extracción con fenol ni precipitación con alcohol y se puede completar en 15 minutos. El ARN purificado está listo para usar en RT-PCR, transferencia Northern, extensión de cebadores y construcción de bibliotecas de ADNc.

La calidad del Total RNA Mini Kit for Tissue se prueba lote a lote de acuerdo con el sistema de gestión de calidad certificado por ISO de IBI. El ARN total se aísla de una muestra de tejido animal de 25 mg, se cuantifica con un espectrofotómetro y se analiza mediante electroforesis.

ESPECIFICACIONES:

Formato: Columna giratoria

Capacidad de unión: 50 µg

Concentración de la muestra: 25 mg de tejido 25 mg de tejido incluido en parafina

Tipo de muestra: tejido animal

Micropistola: Sí

Columna de filtro: Sí

Rendimiento típico: 5-30 µg

Volumen de elución: 50 µl

Tiempo de operación: <15 min.

INFORMACIÓN TÉCNICA:

¿Se pueden usar las columnas de reemplazo de ARN total para la aplicación de miARN? No, existen diferencias sutiles entre las columnas Total RNA y miRNA.

¿Se puede usar el kit de tejido de ARN para insectos? Sí, los kits de tejido de ARN se pueden utilizar para este proceso.

¿Se puede usar el kit Total RNA Tissue para tejido cardíaco? Debería estar bien siempre que el tejido esté completamente homogeneizado y sea una muestra fresca.

Minicolumnas de ARN total y tubos de recogida