KITS PARA AISLAMIENTO DE miARN

miRNA Kit Protocol

• Tamaño de la muestra: 100 mg de tejido/1 × 106 células cultivadas
• Tiempo de funcionamiento: 30 minutos o menos
• Volumen de elución: 50 µl

Los kits de aislamiento de miARN están diseñados para la purificación de microARN (miARN) y otros ARN celulares pequeños a partir de muestras de tejido y células cultivadas. La purificación de miARN permite la investigación de importantes vías biológicas para la regulación génica. El protocolo estándar para aislar el ARN total y el miARN no está optimizado para moléculas de ARN pequeñas y, por lo tanto, provoca la pérdida de cantidades sustanciales de miARN y otros ARN pequeños. Además, se requiere la eliminación de los ARN predominantemente más grandes para un análisis preciso de la expresión de miARN mediante qPCR o análisis de micromatrices. Estos kits están diseñados específicamente para la purificación de ARN pequeño con una contaminación mínima de moléculas de ARN grandes o ADN genómico. El método emplea una columna giratoria con una matriz de filtro a base de sílice que se une al ARN en presencia de una sal caotrópica. Este método se basa en la unión selectiva de moléculas de ARN de varios tamaños a la matriz de fibra a base de sílice cuando hay diferentes concentraciones de etanol en el disolvente.

¿Cuál es la capacidad de unión de la columna de aislamiento de miARN? La capacidad de unión es de aproximadamente 30 µg.

¿Cuáles son los kits comparables de la competencia? QIAGEN miRNeasy Mini Kit

¿Se pueden usar las columnas de reemplazo para ARN total para miARN? No, existen diferencias sutiles entre las columnas de ARN total y las columnas de miARN.

¿Se puede usar el kit de miARN para aislar miARN de la orina? Sí, se deben seguir estos pasos iniciales. 1. Transfiera 10 ml de orina a un tubo de centrífuga de 15 ml (sin ARNasa) y centrifugue a 6000 x g durante 2 minutos. 2. Desechar el sobrenadante; agregue 500 µl de agua libre de ARNasa al precipitado y agite en vórtex durante 5 segundos. 3. Transfiera la muestra a un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml (sin ARNasa). 4. Centrifugar a 6000 x g durante 2 minutos y luego desechar el sobrenadante. Siga el protocolo del kit de aislamiento de miARN, paso 1 Lisis. Añada 200 µl de tampón de lisis en un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml que contenga el sedimento celular.

¿Cuál es la composición del buffer de lisis? Consta de isotiocianato de guanidinio y un detergente: lauroil sarcosinato de sodio.

¿El buffer de lisis simplemente rompe la membrana celular para acceder al miARN o lisa todo el núcleo de la célula? El tampón de lisis del kit de aislamiento de miARN lisará todo el núcleo de la célula.

¿Cuál es el tamaño de los ARN purificados de este kit de miARN? La mayoría de los ARN purificados con el kit de miARN tienen menos de 100 nt. Los ARN ligeramente más grandes también se pueden purificar utilizando un protocolo modificado.

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